隨著微生物快檢技術(shù)日漸頻繁地應用于制藥、干細胞和細胞治療行業(yè)，替代方法驗證成為了大部分質(zhì)量管理和檢驗人員難以跨越的一個難題。

今天本文將通過Q&A的形式就相關(guān)法規(guī)和方案實踐進行簡單分享，Let's go！         

01

Q：關(guān)于快速無菌檢查方法，中國藥典有沒有描述推薦的產(chǎn)品？

A：沒有，根據(jù)ChP《9201藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則》，有推薦的檢測技術(shù)。

9201 藥品微生物檢驗替代方法驗證指導原則

本指導原則是為所采用的的試驗方法能否替代藥典規(guī)定的方法用于藥品微生物的檢驗提供指導。

隨著微生物學的迅速發(fā)展，制藥領(lǐng)域不斷引入了一些新的微生物檢驗技術(shù)，大體可分為三類：

? 基于微生物生長信息的檢驗技術(shù)，如生物發(fā)光技術(shù)、電化學技術(shù)、比濁法等；

? 直接測定被測介質(zhì)中活微生物的檢驗技術(shù)，如固相細胞計數(shù)法、流式細胞計數(shù)法等；

? 基于微生物細胞所含有特定組成成分的分析技術(shù)，如脂肪酸測定技術(shù)、核酸擴增技術(shù)、基因指紋分析技術(shù)等。

這些方法與傳統(tǒng)檢查方法比較，或簡便快速，或具有實時或近實時監(jiān)控的潛力，使生產(chǎn)早期采取糾正措施及監(jiān)控和指導優(yōu)良生產(chǎn)成為可能，同時新技術(shù)的使用也促進了生產(chǎn)成本的降低及檢驗水平的提高。

02

Q：關(guān)于快速微生物培養(yǎng)方法，其它技術(shù)指南有推薦嗎？

A：有，PDA《TR33 可選擇的和快速的微生物檢測方法的評價驗證與執(zhí)行》推薦了熒光染色發(fā)光技術(shù)，商品化產(chǎn)品為默克Milliflex Quantum快速微生物培養(yǎng)系統(tǒng)。

03

Q：關(guān)于快速無菌檢查替代方法的驗證，需要驗證什么項目，怎樣做？

A：無菌檢查方法屬于定性檢驗，需要驗證專屬性、檢測限、耐用性、重現(xiàn)性；

? 專屬性

目的：評估不同種類的微生物能否在規(guī)定的時間內(nèi)生長；

方法：分別接種不大于100cfu的六種標準菌株(如有環(huán)境污染菌更佳)至特定培養(yǎng)基中，按特定的溫度要求培養(yǎng)，接種緩沖液至陰性對照中；環(huán)境污染菌目前的應用有三種程度，1是不用，2是選用，3是分析用；

接受標準：5天內(nèi)陽性對照的微生物生長良好，陰性對照無微生物生長，則設(shè)定5天為報陰時間；否則以微生物檢出時間下限為報陰時間。

? 檢測限

目的：評估樣品中能被檢出微生物的數(shù)量下限；

方法：方法同專屬性，接種不大于10cfu的標準菌株；指導原則雖然推薦不大于5cfu的菌，但通過反復的實驗證明，其較大可能會獲得假陰性結(jié)果，參考指導原則中“確認其應用效果優(yōu)于或等同于藥典的方法”，其檢測限不大于100cfu即可；

接受標準：5天內(nèi)陽性對照的微生物生長良好，陰性對照無微生物生長，以菌落數(shù)目上限作為檢測限。

? 重現(xiàn)性

目的：評估檢驗方法在檢驗結(jié)果上抵抗操作和環(huán)境變化的能力；

方法：方法同專屬性，兩個人員，不同時間，各重復三次；

接受標準：5天內(nèi)陽性對照的微生物生長良好，陰性對照無微生物生長，該接受標準高于卡方檢驗。

卡方檢驗：P值大于0.05則兩種方法之間不存在顯著性差異。

下圖為例：

? 耐用性

目的：評估檢驗參數(shù)有變化時，其結(jié)果不受影響的能力，如對放置時間進行考察，則得出保存條件和時限的依據(jù)；

方法：樣品放置于常溫一定時間后，操作方法同專屬性；

接受標準：5天內(nèi)陽性對照的微生物生長良好，陰性對照無微生物生長，則設(shè)定5天為報陰時間；否則以微生物檢出時間下限為報陰時間；